此類方法主要是利用大鼠畏水及在水中無法進(jìn)入睡眠的生活習(xí)性，通過在盛水的水槽中放置平臺，讓大鼠站立在平臺上，因平臺直徑足夠小(直徑 6.5 cm 或更小)當(dāng)大鼠進(jìn)入 REM 時，因全身肌張力降低引起節(jié)律性低頭觸水以此來達(dá)到剝奪 REM 的目的， 此類方法簡單易行無需復(fù)雜昂貴的設(shè)備，在不同條件的實驗室均能開展因而應(yīng)用廣泛 其主要用來剝奪大鼠的REM ，可分為以下三種方法：

 

1.1單平臺睡眠剝奪法

 

此方法*早于 1964 年被應(yīng)用在貓的睡眠剝奪實驗中，不久以后有人將此方法應(yīng)用于大鼠的睡眠剝奪實驗，，方法為將一圓柱形小平臺 (直徑約 65 m m )放置在長 400 mm寬340 m m高160 mm的水槽中，往水槽中加水至平臺露出水面約 10 mm ，將 1 只大鼠置于小平臺上，大鼠可在平臺上站立，可進(jìn)入 NREM，當(dāng)大鼠進(jìn)入 REM 時全身骨骼肌張力明顯降低，頸部肌張力降低引起節(jié)律性低頭觸水從而無法進(jìn)入 REM，采用 SP 實驗可引起動物的體重及胸腺重量減輕，腎上腺重量增加，血漿中腎上腺皮質(zhì)酮增加，動物攻擊行為增加，機(jī)體**反應(yīng)抑制等。

 

因 SP 是單只大鼠進(jìn)行實驗且在實驗中大鼠的活動空間受限，故有學(xué)者認(rèn)為以上的臨床與實驗室表現(xiàn)可能與大鼠的群體隔離或活動空間受限有關(guān)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，在實驗前群體飼養(yǎng)的動物當(dāng)與群體隔離后也會出現(xiàn)攻擊行為增加，血漿中 CORT 增加，**功能抑制等表現(xiàn)。大鼠活動空間受限也可引起血漿中 CORT 的水平的增加，這些結(jié)果與單平臺睡眠剝奪實驗中見到的類似，為克服SP 中大鼠與群體分離及活動空間受限的缺點，在 SP 基礎(chǔ)上進(jìn)一步發(fā)展為多平臺睡眠剝奪法。

 

1.2多平臺睡眠剝奪法

 

M P法于1981年*先應(yīng)用在大鼠睡眠剝奪實驗中，在 M P中為擴(kuò)展大鼠的活動空間將小平臺由 SP 中的 1 個增加至 7 個，仍將1只大鼠放在小平臺間進(jìn)行睡眠剝奪試驗，因大鼠可以在 7個小平臺間自由活動，故活動范圍較 SP 中有明顯增大。經(jīng)實驗比較，在M P中反映應(yīng)激增強(qiáng)的一些指標(biāo)，如腎上腺重量增加和胸腺重量減少仍然存在，甚至在大鼠血液中 ACTH %CORT 的增加及腎上腺重量的增加較SP的更高，提示 M P較SP有更強(qiáng)的應(yīng)激性!考慮到大鼠為群居動物，單只大鼠實驗易導(dǎo)致與所在群體的隔離。為克服群體隔離所帶來的應(yīng)激反應(yīng)，有學(xué)者將 M P 法進(jìn)一步改良發(fā)展為改良多平臺睡眠剝奪法!

 

1.3改良多平臺睡眠剝奪法

 

在MMPM 中將 10 只大鼠(具體數(shù)目可根據(jù)實際需要確定)同時放在裝有 14 或 15 個小平臺的水槽中(長 127 cm ，寬 44 cm ，高 45 cm )進(jìn)行實驗，這樣既避免了 SP及M P中單只大鼠與群體隔離的缺點，又保留了 M P 中活動范圍增大的特點，因在實驗時大鼠多是 3 只或 4 只一籠進(jìn)行飼養(yǎng)，如 1 組實驗需 10 只大鼠，則需要3籠或 4籠大鼠，考慮到來自不同籠的大鼠放在一起實驗也可能造成群體的不穩(wěn)定，有學(xué)者將實驗方法進(jìn)一步改良，將實驗所需的 10 只大鼠放在同一只籠中飼養(yǎng) 2 周，實驗時再將這些大鼠放在一起同時進(jìn)行睡眠剝奪實驗，這樣以克服實驗時大鼠群體不穩(wěn)定的缺點，從而將實驗時的不確定因素減至*低! 實驗研究發(fā)現(xiàn)在MMPM中"經(jīng)采取措施保持大鼠群體穩(wěn)定性及避免大鼠與群體分離后" 大鼠腎上腺重量%體重減輕量%血清中促腎上腺皮質(zhì)**(A CTH )和腎上腺皮質(zhì)酮 (CO RT) 的含量均較M P中為低，提示M M PM 較 M P 具有更低的應(yīng)激性，是較為理想的REM 剝奪方法。

 

2強(qiáng)迫運動睡眠剝奪法

 

此類睡眠剝奪方法形式多樣，在腦電監(jiān)護(hù)情況下可行全部的睡眠剝奪和選擇性的睡眠剝奪。其共同特點是通過動力裝置迫使大鼠不停地運動，從而達(dá)到睡眠剝奪的目的。此類方法的優(yōu)點是睡眠剝奪效果明顯，睡眠剝奪的時間及強(qiáng)度易于掌握，重復(fù)性好，無須實驗人員隨時觀察實驗情況，減輕了實驗人員工作強(qiáng)度。缺點是長時間運動引起機(jī)體的一系列應(yīng)激反應(yīng)可能干擾睡眠剝奪的實驗結(jié)果，現(xiàn)選取其中兩種有代表意義的方法介紹如下

 

2.1水平轉(zhuǎn)盤睡眠剝奪法

 

此方法應(yīng)用廣泛，于 1983 年*先應(yīng)用在睡眠剝奪實驗中，實驗裝置由一個電腦控制臺、一個水平轉(zhuǎn)盤及兩個開放的長方形有機(jī)玻璃缸組成，轉(zhuǎn)盤直徑為 46 cm，在電腦控制下可以按順時針逆時針方向隨機(jī)水平轉(zhuǎn)動! 兩只有機(jī)玻璃缸的尺寸均為長60 cm ，寬20.5 cm，高 60 cm 。在距離缸底 5 cm 處的缸側(cè)壁開有一條縫隙，使轉(zhuǎn)盤的一半能分別從縫隙伸入兩只玻璃缸中并能隨意轉(zhuǎn)動。缸底留置水約 2 cm 深，轉(zhuǎn)盤離水面約3 cm 實驗前1周將睡眠剝奪大鼠頭頸部植入微電極" 并將微電極與電腦控制臺相連，將大鼠放在轉(zhuǎn)盤上適應(yīng)環(huán)境1周，每天約1 h讓大鼠習(xí)慣在轉(zhuǎn)盤上活動，進(jìn)水，進(jìn)食等。實驗時將實驗組的大鼠及對照組的大鼠分別置于兩只缸中的轉(zhuǎn)盤上，當(dāng)電腦通過微電極監(jiān)測到實驗組大鼠進(jìn)入慢波或快波睡眠的腦電信號后，立即發(fā)出指令使轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)動 6 s(6 s內(nèi)轉(zhuǎn)動 1/3 圈)，當(dāng)大鼠被轉(zhuǎn)到玻璃缸壁時，因被玻璃缸壁擋住而可能掉入水中，每次在實驗組睡眠剝奪大鼠進(jìn)入睡眠時轉(zhuǎn)盤即轉(zhuǎn)動 6 s，方向隨機(jī)，轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)動時兩只大鼠均被動地隨著轉(zhuǎn)盤移動。此方法一次只剝奪一只大鼠睡眠，當(dāng)實驗組的睡眠剝奪大鼠在活動、進(jìn)水、進(jìn)食時轉(zhuǎn)盤并不轉(zhuǎn)動而此時對照組的大鼠則可趁機(jī)睡覺以彌補(bǔ)被剝奪的睡眠。此方法中睡眠剝奪組大鼠與對照組大鼠條件極其相似，因而可減少因?qū)嶒灄l件不同而所致的應(yīng)激反應(yīng)。

 

2.2旋轉(zhuǎn)圓筒睡眠剝奪法

 

此方法于 1979 年*先應(yīng)用于睡眠剝奪實驗中，設(shè)備主要由一柱形圓筒及一小型慢速馬達(dá)構(gòu)成。圓筒直徑 30 cm，高 30 cm 。圓筒底由 PVC (聚氯乙烯)構(gòu)成，側(cè)壁由直徑為 10.4 m m 的 PVC 桿圍成。桿長度 30 cm，桿之間間隔 15.5 m m，圓筒與小型馬達(dá)相連。馬達(dá)轉(zhuǎn)速為每 45 s轉(zhuǎn) 1 圈(也有學(xué)者應(yīng)用每 m in 轉(zhuǎn) 1 圈)。至少在實驗前 2 d每天將大鼠放入圓筒中適應(yīng)環(huán)境 1 次，適應(yīng)時間不少于 3 h。實驗時將馬達(dá)按 45 s每1 圈進(jìn)行勻速轉(zhuǎn)動，通過圓筒的轉(zhuǎn)動帶動大鼠不停運動而達(dá)到睡眠剝奪的目的。此類方法簡單易行，睡眠剝奪效果明顯。缺點是長時間不停運動可引起機(jī)體的運動后應(yīng)激反應(yīng)及身體疲勞，可能干擾睡眠剝奪實驗結(jié)果! 此類方法發(fā)展出多種變化，有實驗者在進(jìn)行新生大鼠睡眠剝奪時將筒旋轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)至 2~3 r/m in后期逐漸增加至 6~7 r/m in。

 

3輕柔刺激法

 

此方法在短期的睡眠剝奪實驗中應(yīng)用較多，當(dāng)實驗人員通過觀察大鼠行為或通過腦電波監(jiān)護(hù)觀察到大鼠進(jìn)入睡眠時，通過輕輕拍打大鼠籠子或應(yīng)用聲音、光線的刺激促使大鼠保持清醒，必要時還可用紙卷、鉛筆或用手直接觸摸大鼠使大鼠無法進(jìn)入睡眠。注意不能將大鼠移出籠外!此方法簡單易行，在腦電監(jiān)護(hù)情況下可進(jìn)行 TSD 或 SSD 實驗，在無腦電監(jiān)護(hù)時需要實驗人員在旁不間斷觀察大鼠行為，故較適合行短時間的睡眠剝奪實驗。

 

4**睡眠剝奪法

 

定時給大鼠注射**， 此類方法簡單易行，操作方便，不需要特殊儀器。缺點是大鼠存在個體差異， 睡眠剝奪的效果及程度及不易掌握。多用在研究某些特殊**藥理作用的實驗中。

 

5. 剝奪桿睡眠剝奪法

 

在標(biāo)準(zhǔn)實驗室籠中采用間隙性的剝奪桿掃描進(jìn)行觸覺刺激來干擾自由行為的小鼠。該方法防止了人類接觸和干預(yù)對睡眠剝奪的影響，并且在整個睡眠剝奪過程期間*小化身體活動。此外，該程序準(zhǔn)確且可預(yù)測。實驗室動物從小都是在飼養(yǎng)籠中長大，基于實驗室飼養(yǎng)籠使得動物能夠保持在正常的社會環(huán)境中實施了一種相對無壓力的方法來誘導(dǎo)動物睡眠剝奪模型，從而避免了外界環(huán)境及其他因素對睡眠剝奪的影響。此外，基于飼養(yǎng)籠式的睡眠剝奪儀易于組裝和清洗，設(shè)計更加地人性化。